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产品信息:

产品描述:

        Western 及 IP 细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一种在非变性条件裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于 PAGE，Western，免疫沉淀(immunolprecipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

      Western 及 IP 细胞裂解液的主要成分为 20mM Tris (pH7.5)，150mM NaCl，1% TritonX-100，以及 sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin 等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

     用 Western 及 IP 细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

运输与保存方法:

冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

注意事项:

1.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3本产品仅作科研用途！

使用说明:

对于培养细胞样品：

1、融解 Western 及 IP 细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加 入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

2、对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中 的蛋白没有干扰，可不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100-200ul 裂解液的比例加入裂解液。用 枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：

      离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入100-200ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

3、充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。