价格:360
货号Ar.A4 化学感受态细胞
产品详情
产品详情
产品规格 （CAT#: AC1050）
| 品目 | 描述 |
| Ar.A4 | 100μl/支 |
| pK7WGF2（control vector，10ng/μl ) | 10μl |
| 保存条件(保质期) | -80℃（12个月） |
基因型
Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。本公司生产的Ar.A4化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒（壮观霉素抗性）检测，转化效率>104 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1.取-80℃保存的Ar A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量）
，用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、
冰浴5分钟。
3.冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基，于 28℃振荡培养 2小时。
4.6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，
倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天
农杆菌相关抗生素配方
|
抗生素 |
配方 |
原液 |
工作液 |
|
羧苄青霉素 (carb) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
硫酸卡那霉素 (kan) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
链霉素 (strep) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
10 mg/ml |
50 μg/ml |
|
利福平 (rif) |
DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
10 mg/ml |
20 μg/ml |
|
庆大霉素 (gent) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
20 mg/ml |
40 μg/ml |
|
氯霉素（cam） |
无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
34 mg/ml |
34 ug/ml |
常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
|
农杆菌菌株 |
羧苄青霉素(carb) |
链霉素(strep) |
利福平(rif) |
氯霉素(gent) |
硫酸卡那霉素(kan) |
|
Ar.A4 |
S |
S |
S |
S |
R |
|
MSU440 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.Qual |
S |
R |
S |
R |
S |
|
C58C1 |
S |
R |
R |
S |
S |
|
ATCC15834 |
S |
S |
S |
S |
S |
|
K599 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.1193 |
R |
R |
R |
S |
S |
TY配方（1L）
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。
注意事项
1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转
化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2.混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，
与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获
得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4.Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。
5.本产品仅作科研用途！