价格:600
货号Ar.1193 电激感受态细胞
产品详情
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产品规格 （CAT#: AE1090）
| 品目 | 描述 |
| Ar.1193 Electro | 50μl/支 |
| pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl ) | 10μl |
| 保存条件(保质期) | -80℃（12个月） |
基因型
Agrobacterium rhizogenes (carb R,strR,lifR ) pRi1193 (agropine type)
产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.1193发根农杆菌含有pRi1193农杆碱型Ri质粒，特别适合豆科，茄科植物毛状根的诱导，同时具有羧苄青霉素，链霉素，利福平抗性。本产品Ar.1193电转感受态特别适用于大质粒的转化，感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>105 cfu/μg DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40 kb）检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入0.01-1 μg质粒DNA（体积不大于6ul，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解；转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯从冰中拿出，吸水纸吸干外表面水份，快速放入电转槽中，启动电击，电击完成快速插入冰中，加入1 ml无抗生素的TY，并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4.6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天
农杆菌相关抗生素配方
|
抗生素 |
配方 |
原液 |
工作液 |
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羧苄青霉素 (carb) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
硫酸卡那霉素 (kan) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
链霉素 (strep) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
10 mg/ml |
50 μg/ml |
|
利福平 (rif) |
DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
10 mg/ml |
20 μg/ml |
|
庆大霉素 (gent) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
20 mg/ml |
40 μg/ml |
|
氯霉素（cam） |
无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
34 mg/ml |
34 ug/ml |
常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
|
农杆菌菌株 |
羧苄青霉素(carb) |
链霉素(strep) |
利福平(rif) |
氯霉素(cam) |
硫酸卡那霉素(kan) |
|
Ar.A4 |
S |
S |
S |
S |
R |
|
MSU440 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.Qual |
S |
R |
S |
R |
S |
|
C58C1 |
S |
R |
R |
S |
S |
|
ATCC15834 |
S |
S |
S |
S |
S |
|
K599 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.1193 |
R |
R |
R |
S |
S |
TY配方（1L）
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。
注意事项
1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2.电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量。
4. Ar.1193具有羧苄青霉素，链霉素，利福平抗性，不可用于具有羧苄青霉素，链霉素，利福平抗性质粒的转化。
5.本产品仅作科研用途！